Sanger测序：基因解码的黄金标准_Sanger测序的方法与原理揭秘

Sanger测序：基因解码的黄金标准

Sanger测序的方法与原理揭秘

1、Sanger测序是什么？简单说，就是第一代DNA测序技术，1977年由弗雷德里克·桑格发明。直到今天，Sanger测序仍是基因检测的“金标准”，尤其在精准度要求高的场景。

2、Sanger测序的核心原理：通过链终止反应生成不同长度的DNA片段。利用ddNTP（双脱氧核苷酸）随机终止复制，再通过电泳分离片段，最后读取碱基序列。

3、为什么选Sanger测序？因为准确率高达99.99%。比如临床诊断单基因病、法医亲子鉴定，必须依赖Sanger测序的精准结果。

Sanger测序的四大应用场景

1、疾病诊断：Sanger测序用于检测BRCA1/2乳腺癌基因、囊性纤维化突变等。医院检验科常用它做最终确诊依据。

2、科研验证：新一代测序（NGS）发现可疑突变后，必须用Sanger测序二次验证。这是发SCI论文的硬性要求。

3、法医鉴定：Sanger测序分析STR位点，比快检试纸更可靠。公安部物证中心的标准流程中，Sanger测序不可替代。

4、微生物检测：食品中致病菌的溯源分析，比如沙门氏菌分型，Sanger测序仍是ISO认证方法。

Sanger测序实操指南

1、样本要求：DNA浓度需≥10 ng/μL，纯度A260/A280在1.8-2.0之间。如果做PCR产物测序，建议纯化后再送样。

2、引物设计：Sanger测序需要特异性引物，退火温度建议58-62℃。避免引物二聚体或发夹结构，可用Primer-BLAST在线验证。

3、结果解读：用Chromas软件看峰图。杂合突变会显示套峰，此时建议反向测序复核。Sanger测序的原始数据必须保存至少5年。

Sanger测序VS新一代测序

1、读长优势：Sanger测序单次可读800-1000bp，远超NGS的150-300bp。需要长片段拼接时，Sanger测序效率更高。

2、成本对比：单个样本测序，Sanger测序价格约50-100元，NGS通量高但开机成本超万元。小样本量优选Sanger测序。

3、错误率差异：NGS的原始错误率约0.1%-1%，而Sanger测序错误率低于0.001%。涉及治疗方案的关键突变，必须用Sanger测序复核。

Sanger测序常见问题解答

1、能做全基因组测序吗？不能。Sanger测序适合靶向测序，全基因组需用NGS。但特定基因的深度覆盖，Sanger测序更经济。

2、需要多久出结果？常规样本24小时内完成，加急服务可缩短至6小时。比NGS的3-7天周期快得多。

3、能否检测CNV？不能。Sanger测序主要检测点突变和小片段插入缺失，拷贝数变异需结合qPCR或MLPA。

4、为什么叫第一代？因为Sanger测序是首个自动化测序技术，后续的焦磷酸测序、边合成边测序等被归为二、三代。