高效液相色谱仪：原理详解与操作全流程指南_高效液相色谱仪的核心原理与优势

高效液相色谱仪：原理详解与操作全流程指南

高效液相色谱仪的核心原理与优势

1、高效液相色谱仪（HPLC）是实验室分离分析复杂混合物的“黄金工具”。原理简单说：利用高压泵推动流动相携带样品通过色谱柱，不同成分因分配系数差异被分离，最终由检测器捕捉信号。
2、高效液相色谱仪的核心优势？灵敏度高、分离速度快、重复性好。尤其适合药物分析、食品安全、环境监测等领域，应用场景超广。
3、想用好高效液相色谱仪，必须懂流动相选择。比如反相色谱常用甲醇/水，离子交换色谱需调节pH缓冲液。流动相配比直接影响分离效果，新手别忽略！

高效液相色谱仪操作全流程8步法

1、开机准备：高效液相色谱仪操作前，先检查流动相是否足量、管路无气泡。开机后，启动泵以低流速冲洗系统，确保基线稳定。
2、色谱柱安装：注意高效液相色谱仪柱温箱温度设置（通常25-40℃），柱头方向别装反！新柱需用流动相活化至少30分钟。
3、参数设置：流速常选1.0 mL/min（分析柱）或0.2-0.5 mL/min（微径柱），检测波长根据目标物紫外吸收峰确定。
4、样品处理：高效液相色谱仪对样品要求高，需过0.22 μm滤膜。复杂基质建议固相萃取预处理，避免堵塞色谱柱。
5、进样操作：手动进样器需快速切换至“Load”位，注射样品后立即转回“Inject”。自动进样器设置好洗针程序，防止交叉污染。
6、数据采集：高效液相色谱仪运行中密切观察压力波动。正常压力范围视色谱柱而定，突然升高可能柱堵塞，立即停泵排查！
7、关机维护：实验结束先用高比例水相冲洗色谱柱（如C18柱用5%甲醇冲洗30分钟），再逐步降低流速至0。
8、记录保存：高效液相色谱仪每次操作后必须记录色谱条件、柱压变化、异常现象，方便后续问题追溯。

高效液相色谱仪日常维护5大关键点

1、流动相过滤：高效液相色谱仪流动相必须用0.45 μm滤膜过滤，超声脱气后再用，否则易产生气泡干扰基线。
2、泵密封维护：每月检查高效液相色谱仪柱塞杆磨损情况，若有结晶或划痕，用异丙醇棉签清洁后涂抹专用密封润滑剂。
3、检测器保养：UV检测器流通池每周用10%硝酸浸泡1小时，DI水冲洗。避免长时间满量程运行，防止光电倍增管老化。
4、色谱柱保存：高效液相色谱仪长期不用时，色谱柱应保存在纯甲醇中，两端拧紧堵头，标注保存液类型和日期。
5、压力校准：每季度用标准压力计校验高效液相色谱仪泵的压力传感器，误差超过±5%需联系工程师校准。

高效液相色谱仪常见故障速查表

1、基线噪音大？高效液相色谱仪可能原因：检测器灯能量不足、流动相污染、色谱柱污染。处理：更换氘灯、重配流动相、反向冲洗色谱柱。
2、保留时间漂移？高效液相色谱仪常见于柱温波动或流动相比例变化。检查柱温箱稳定性，确认梯度程序是否正确执行。
3、峰分叉/拖尾？高效液相色谱仪色谱柱可能塌陷或筛板堵塞。尝试切割柱头0.5-1 mm，或用5%硝酸冲洗筛板。
4、压力异常升高？高效液相色谱仪需排查管路堵塞：分段拆开管路，从检测器端反向冲洗，确定堵塞位置后更换部件。

高效液相色谱仪选型与升级建议

1、基础款高效液相色谱仪选等度系统，预算约15-20万。研究级需求选二元梯度+自动进样器，价格30万起。
2、升级高效液相色谱仪检测器？考虑配置DAD检测器（多波长扫描）或荧光检测器（灵敏度提升10-100倍）。
3、未来趋势：超高效液相色谱仪（UHPLC）压力达15000 psi，但需匹配专用色谱柱。常规实验室高效液相色谱仪升级时，优先考虑兼容亚2 μm填料的系统。